如何儲(chǔ)存酸性磷酸酶(ACP)檢測(cè)試劑盒(磷酸苯二鈉微板法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，所以常作為溶酶體標(biāo)志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞質(zhì)內(nèi)，各種動(dòng)物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜 pH 為 4.5～5.5。酸性磷酸酶是一個(gè)蛋白家族，哺乳動(dòng)物中其分子量從 18kD 到 100kD 不等，該酶分為兩類，一類為酒石酸鹽敏感型，一類為氟離子敏感型。溶酶體中的酸性磷酸酶為酒石酸鹽敏感型，而紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的酸性磷酸酶為氟離子敏感型。酸性磷酸酶(ACP)檢測(cè)試劑盒(磷酸苯二鈉微板法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)檢測(cè)原理是酸性磷酸酶(ACP)水解磷酸苯二鈉，產(chǎn)生酚和無機(jī)磷，經(jīng)堿處理后酚能與 4-AAP 反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)氧化生成紅色醌類化合物，紅色越多說明酸性磷酸酶活性越高，反之則酶活性越低，通過分光光度比色法測(cè)定 510nm 處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以計(jì)算出酸性磷酸酶活性水平。該試劑盒主要用于檢測(cè)血清中前列腺酸性磷酸酶活性，亦可用于檢測(cè)細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

自備材料：

1、蒸餾水

2、離心管或試管

3、恒溫箱或水浴鍋

4、96 孔板

5、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：

①血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，尿液通常也可以直接用于測(cè)定，-20℃凍存，用于酸性磷酸酶的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要可用 PBS 或生理鹽水進(jìn)行適當(dāng)勻漿，一般細(xì)胞數(shù)量在 106以上，組織應(yīng)在 100mg 以上，3000~4000g 離心取上清，-20℃凍存，用于酸性磷酸酶的檢測(cè)。

③植物樣品：取適量的植物組織加入少量生理鹽水或 PBS，充分搗碎或研磨，靜置 30min，用紗布或?yàn)V紙過濾，4000g 離心 20min，留取上清液并測(cè)量體積，-20℃凍存，用于酸性磷酸酶的檢測(cè)。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的酸性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 PBS 等進(jìn)行稀釋，也可以采用 ACP Assay buffer 稀釋。

2、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取適量的 Phenol(10mM)和蒸餾水，按下表稀釋成 0、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM。

3、ACP 加樣：按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。

4、ACP 測(cè)定：輕輕混勻，室溫放置 10min，空白孔調(diào)零，酶標(biāo)儀測(cè)定 510nm 處標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔的吸光度(記為 A 標(biāo)準(zhǔn)、A 測(cè)定)，一般 15min 內(nèi)檢測(cè)完畢。

計(jì)算：

ACP 活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下，每分鐘每 ml酶液產(chǎn)生1nmol酚(nmol/ml·min)為一個(gè)活性單位。求平均值，以各標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的酚含量即 ACP 活性(U/L)為橫坐標(biāo)，繪制 ACP 活性單位吸光度值曲線，即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)測(cè)得的各待測(cè)樣品的吸光度，于標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的 ACP 活性單位，乘以稀釋倍數(shù)后，換算為”nmol/ml·min”的活性單位。

組織或植物粗酶液獲得率(ml)=上清液體積(ml)/組織或植物質(zhì)量×100%

注意事項(xiàng)：

1、 待測(cè)樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以使標(biāo)準(zhǔn)更準(zhǔn)確，另外標(biāo)準(zhǔn)品需避免反復(fù)凍融。

3、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。

4、 所測(cè)樣品的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)用 ACP Assay buffer 稀釋樣品后重新測(cè)定。

5、 待測(cè)樣品中酸性磷酸酶活性較低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間至 30min。

6、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。

如何儲(chǔ)存酸性磷酸酶(ACP)檢測(cè)試劑盒(磷酸苯二鈉微板法)