超微量 Na +K + 、Ca 2+Mg 2+ 、總 ATP 酶測(cè)試盒的樣本前處理

（測(cè)組織、培養(yǎng)細(xì)胞）

一、測(cè)定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無(wú)機(jī)磷，測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量可

計(jì)算 ATP 酶活力的高低。

二、測(cè)定意義：

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜上的一種

蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具有重要的

作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，此酶活力發(fā)生一系列改變，

另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關(guān)。

三、試劑組成與配制：

四、樣本的前處理：

1、組織的前處理：（組織勻漿上清液的制備參考實(shí)驗(yàn)方法學(xué)）

準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量，按重量（g）：體積(mL)=1:9 的比

例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，

2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液（即 10%的勻漿上清

液），再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%，同時(shí)用考馬斯亮藍(lán)

試劑測(cè)定組織蛋白（試劑本所有售）。如果預(yù)試結(jié)果太高，

再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后再?zèng)Q定

取樣濃度。

2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：將培養(yǎng)細(xì)胞消化，離心，棄上清，留

下層細(xì)胞，每管加 0.2～0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成

10 7 /cm3細(xì)胞懸液，即 10 7 /mL，再進(jìn)行破碎。破碎細(xì)胞的方

法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。

③、反復(fù)凍溶 3 次（第③種方法有時(shí)會(huì)影響酶活力）。制備

好的細(xì)胞懸液不需要離心，同時(shí)用考馬斯亮蘭試劑測(cè)定組

織蛋白（試劑本所有售）。再將細(xì)胞勻漿液稀釋成不同濃度

進(jìn)行預(yù)試，根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定取樣濃度。

[注 1]：在測(cè)試加樣前要搖勻后取樣。

[注 2]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或

稀釋樣本。

[注 3]：預(yù)試結(jié)果將絕對(duì)吸光度值（測(cè)定管吸光度值—對(duì)照

管吸光度值）控制在 0.2 左右為宜。

 超微量 Na +K + 、Ca 2+Mg 2+ 、總 ATP 酶測(cè)試盒的樣本前處理