TEV蛋白酶的應(yīng)用

rTEV 蛋白酶(重組型)是經(jīng)過基因工程改造后的重組蛋白酶，該酶特異性識(shí)Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly 七氨基酸序列。rTEV 蛋白酶與腸激酶 U(EK)、Thrombin、FactorXa、SUMO 等蛋白酶相比，具有高活性、高特異性的雙重特點(diǎn)，rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特異性，已成為融合蛋白表達(dá)后去除融合 tag 的首選蛋白酶。該酶經(jīng) 6×His 標(biāo)簽純化而得(含組胺酸標(biāo)簽)，純度達(dá)99％， 剪切反應(yīng)完畢后可通過His標(biāo)簽純化樹脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。

影響天然TEV酶活性的常見因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上這些蛋白酶抑制劑對(duì)rTEV的活性沒有影響；2）Zn離子（＞5 mM）對(duì)rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。

表達(dá)方式: A DNA sequence encoding the TEV Protease （NP_062908） （Gly 2038- Gly 2280） was fused with polyhistidine tag at the N-terminus, with a Ser 2256 Asn mutation

種屬:Human

表達(dá)宿主: E.Coli

QC Testing

純度:> 95%, as determined by SDS-PAGE

內(nèi)毒素:< ﹤1.0 EU per 1μg cytokine as determined by the LAL method.

穩(wěn)定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt -70°C

預(yù)測(cè)N端: Met 1

分子量:The recombinant human TEV protease consists of 251 amino acids and has a predicted molecular mass of 28.6 kDa. As estimated in SDS-PAGE under reducing conditions.

緩沖液: Supplied as a 0.2μm filtered solution of 50mM Tris, 10%Sucrose,5mM DTT pH8.0

SDS-PAGE:

Usage Guide

儲(chǔ)存方法:Store it under sterile conditions at -70℃. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage and usage. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

特性：

特異性：TEV蛋白酶具有高度特異性，能夠選擇性地剪切含有特定識(shí)別序列（如Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser7）的多肽鏈，而不會(huì)引起非特異性剪切或其他與剪切位點(diǎn)無關(guān)的酶活性。

催化效率：TEV蛋白酶的催化效率很高，能夠在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)蛋白酶解反應(yīng)。

穩(wěn)定性：TEV蛋白酶具有較好的耐熱性和耐酸堿性，可以在不同的反應(yīng)條件下工作。

活性：TEV蛋白酶在低溫下也具有活性，并且其突變體具有自溶耐受性。

應(yīng)用：

重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)：TEV蛋白酶常用于從融合蛋白中去除親和純化標(biāo)簽，如GST、His等，從而得到純化的目標(biāo)蛋白。

結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究：在結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究中，TEV蛋白酶可用于切割目標(biāo)蛋白分子中特定的位點(diǎn)，以便于分子結(jié)構(gòu)的研究。

蛋白酶解研究：TEV蛋白酶還可用于研究蛋白質(zhì)酶解過程中的底物選擇性、酶解位點(diǎn)、速率等相關(guān)問題。