信帆生物明膠酶譜試劑盒英文文獻(xiàn)

標(biāo)題：

相關(guān)產(chǎn)品如下：

檢測(cè)原理：

本試劑盒采用凝膠反相酶譜法(Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9 活性及其無活性前體酶原譜系。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法，其靈敏度可達(dá)1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備含有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳時(shí)SDS與樣本中的MMP可逆性結(jié)合，導(dǎo)致MMP氫鍵和疏水鍵破壞而不能發(fā)揮分解明膠的作用。電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer孵育，MMP恢復(fù)活性，凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測(cè)少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行25-50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè)（如果樣本MMP含量高，孵育時(shí)間短，不用換液可最多50次），如果小膠加樣孔為10~15個(gè)，則總計(jì)可最多檢測(cè)500~750個(gè)樣品。

常規(guī)考馬斯亮藍(lán)SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)染色是實(shí)驗(yàn)室常用的凝膠染色方法。銀染方法雖然靈敏度高，但所需試劑復(fù)雜并且有毒有害，操作步驟繁瑣，難以控制獲得好的染色效果。

染色步驟：

1. 此染色液即為工作液，使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝

膠，并緩慢搖動(dòng)2h；

2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；

3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動(dòng)2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要2～4h，也可脫色過夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景）；

4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置對(duì)凝膠進(jìn)行處理后保存。